從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA

*，從土壤中提取DNA已非易事，而想從中再提取RNA可說是難上加難。DNA不容易提取是因?yàn)楸旧硗寥乐懈患牟牧暇蜕伲崛∵^程相對(duì)復(fù)雜，造成操作損失；而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外，還有一個(gè)很關(guān)鍵的原因——無(wú)處不在的RNA酶，對(duì)RNA的穩(wěn)定存在構(gòu)成極大威脅。另外還有一點(diǎn)就是土壤中某些物質(zhì)的微量殘留都會(huì)影響到科研人員后期PCR反應(yīng)。這就是目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)中土壤RNA提取產(chǎn)品不多的原因。
    因此要想對(duì)土壤RNA有較好的提取效果，我們就必須知己知彼，既要對(duì)研究對(duì)象（土壤）熟知，又要對(duì)研究工具（試劑盒）熟悉。
土壤中重要物質(zhì)腐殖質(zhì)
土壤除了為陸生植物提供營(yíng)養(yǎng)源和水分之外，還是植物生長(zhǎng)，進(jìn)行光合作用、能量交換的主要場(chǎng)所；同時(shí)也具有微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的一切營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及各種條件，是微生物良好的生活場(chǎng)所，有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱。因此土壤是一種重要的環(huán)境要素。
簡(jiǎn)單說，土壤是由固相（礦物質(zhì)、有機(jī)質(zhì)）、液相（土壤水分或溶液）和氣相（土壤空氣）三相物質(zhì)四種成分有機(jī)地組成。而所有這些組成在土壤微生物的存在下卻能形成一種對(duì)作物生長(zhǎng)有利，對(duì)科研人員非常不利的物質(zhì)——腐殖質(zhì)。污泥中也不例外，同樣有腐植酸和富里酸存在。
腐殖質(zhì)是由一些異養(yǎng)的微生物，如某些腐生細(xì)菌，把土壤中的動(dòng)、植物殘?bào)w和有機(jī)肥料分解，與礦物質(zhì)顆粒緊密結(jié)合在一起而形成的一種黑色的膠狀物質(zhì)，是土壤有機(jī)質(zhì)的主要類型，一般占土壤有機(jī)質(zhì)總量的85—90％以上。腐殖質(zhì)既含有氮、磷、 鉀、疏、鈣等大量元素，還有微量元素；另外在分解過程中還會(huì)產(chǎn)生腐殖酸、有機(jī)酸、維生素及一些激素等。在水體中，腐殖質(zhì)主要指腐殖酸和富里酸。實(shí)驗(yàn)證明，微量腐殖酸或富里酸的存在就會(huì)導(dǎo)致PCR的失?。∵@在眾多公司的提取試劑盒中都有相應(yīng)說明。
再加上近期土壤污染（肥料、農(nóng)藥等）的存在，因此導(dǎo)致提取對(duì)象成份非常復(fù)雜，提取難度也就可想而知。有的公司產(chǎn)品即使有少量的RNA提出，也會(huì)造成科研人員后期的實(shí)驗(yàn)不順暢，這樣的例子已司空見慣。因此解決從土壤提取RNA后腐殖質(zhì)殘留以及其它影響成分的有效去除成了各家公司關(guān)注的焦點(diǎn)。
土壤RNA提取試劑盒
目前市場(chǎng)上常見的試劑盒大概有3-4中，這些試劑盒又通常采用玻璃珠（鋼珠）破碎的方法，然后用玻璃奶和吸附柱反復(fù)漂洗去除雜質(zhì)和腐殖酸，操作過程極其復(fù)雜，一般需要2.5小時(shí)以上的操作時(shí)間。使用，可能會(huì)因?yàn)椴襟E不熟練，超過4個(gè)小時(shí)。并且有些操作在常溫進(jìn)行，這就很難對(duì)RNA進(jìn)行有效保護(hù)，結(jié)果可能會(huì)導(dǎo)致即使有RNA的提出，也不再是完整的RNA片段，造成部分或全部降解。
因此，提取過程耗時(shí)短，影響物質(zhì)（腐殖質(zhì)等）去除干凈，提取過程RNA穩(wěn)定才是從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA的必要條件。針對(duì)這一目標(biāo)，百泰克公司經(jīng)過多年的不斷探索，集眾家所長(zhǎng)，終于開發(fā)了一款非常方便簡(jiǎn)單快捷的提取土壤（污泥）中RNA的試劑盒，該試劑盒具有以下特點(diǎn)：
l  操作簡(jiǎn)便 
整個(gè)過程，操作時(shí)間僅需1小時(shí)，熟練時(shí)，能更快，避免操作時(shí)間過長(zhǎng)RNA降解
l  破碎方法優(yōu)良 
采用常見的液氮研磨，既能使RNA處于低溫的保護(hù)狀態(tài)，不容易降解，又不需要特殊的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)成本。同時(shí)還可避免玻璃珠破碎過于劇烈導(dǎo)致的片段機(jī)械損傷。另外，玻璃珠破碎一般需要儀器，有些試劑盒不買儀器沒法使用，而一般的渦旋也很難取得好的破碎效果。
l  新型腐殖酸去除技術(shù) 
采用創(chuàng)新的腐殖酸去除技術(shù)，短時(shí)間內(nèi)就可達(dá)到很好的去除效果
l  不需單獨(dú)去除DNA 
操作過程中已經(jīng)去除DNA，不需另外單加DNA酶再去除DNA的步驟，省時(shí)省力。